PCR仪器如何校准

实时荧光定量PCR检测仪是我们病毒核酸检测中常用到的仪器之一，在我们的日常实验室活动中，我们应该如何自行校准呢？下面以ABI7500型实时荧光定量PCR检测仪为例，

第一步：进入校准页面。

1.     打开软件【7500 Software v2.3】→选择【Instrument（仪器）】    →【Instrument Maintenance Manager（仪器维护）】，进入仪器校准界面。

第二步：校准【ROI】

1. 2.1 更换托板

     更换校准专用托板。

   备注：校准专用托板右上角有7500 FAST ONLY字样

2. 2.2 选择ROI校准板

     上机前需将板中液体甩至底部。上机后进行电脑操作。

   注意：校准板侧面有写校准板名称，核对后方可上机。

第二步：校准【ROI】

      2.3单击【Start Clatration】→【Next】→【Next】→【Next】→【Next】→【Start Run】。

1. 等待十分钟....看是否校准成功？

   成功之后可校准第二板块【Background】

    

   
   

2. 第三步：校准【Background】

    3.1 选择Background校准板，将板中液体甩至底部后上机，再进行电脑操作。

   提示：一般建议1-2个月做一次背景 校准。

3. 第三步：校准【Background】

   3.2 单击【Start Clatration】→【Next】→【Next】→【Next】→【Next】→【Start Run】。

   等待十分钟....

4. 第三步：校准【Background】

   评价标准：通道A、B、C、D荧光值≤72000FUS，通道E荧光值≤90000FUS

   
   

   校准结果：

     （1）若成功，进行下一步。更换Optical板，按照【ROI】和【Backgroun】操作步骤校准【Optical】；

     （2）若失败，将不合格的孔用无水乙醇和无银棉签清理后重复校准【Background】，直至背景校准合格。

5. 第四步：校准【Optical】

      更换Optical板，操作步骤同【ROI】和【Background】。

      等待十分钟...

   【Optical】校准成功后，进入第五步，校准【Dye】

    

   
   

6. 第五步：校准【Dye】

   5.1 选择校准板

     单击【Dye】→【Start Clatration】→【Next】→勾选要校准的染料种类(视频只演示FAM、ROX和TAMAR)→【Next】→【Next】→【Next】→【Run Status - FAM】界面

7. 第五步：校准【Dye】

   5.2 选择FAM校准板

     将板中液体甩至底部，上机。单击【Start Run】开始校准。

     其他染料校准板操作同FAM，待所有染料种类校准结束之后此次校准就结束！